文章來源：藥靶孺子牛
銀屑病（Poriasis）是一種常見且復(fù)發(fā)率高的慢性炎癥性皮膚病，常表現(xiàn)為局限或廣泛分布的鱗屑性紅斑或斑塊，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。磷酸二酯酶4（PDE4）是近年來銀屑病治療領(lǐng)域備受關(guān)注的藥物靶標(biāo)之一，但目前臨床使用的PDE4抑制劑如阿普斯特（Apremilast）存在胃腸道等副作用而限制了其應(yīng)用。
作者利用內(nèi)部的1200種中草藥甲醇提取物文庫進(jìn)行了一項PDE4抑制劑篩選。其中，側(cè)柏的甲醇提取物在低至0.2 μg/mL的濃度下顯示出顯著的PDE4抑制活性，達(dá)到42.7%。進(jìn)一步研究不同極性組分提取物PDE4的抑制活性，發(fā)現(xiàn)側(cè)柏石油醚組分活性最強(qiáng)，HPLC分析及柱層析純化分離出5個化合物，myricitrin、quercitrin、afzelin、amentoflavone（AMF），以及hinokiflavone，其中AMF顯示出最強(qiáng)PDE4抑制活性（圖1、表1）。
圖1?對中藥文庫進(jìn)行PDE4D抑制篩選發(fā)現(xiàn)了側(cè)柏
表1?側(cè)柏提取物及化合物對PDE4D的抑制活性
此外，MST證實AMF與PDE4的結(jié)合，分子對接預(yù)測了結(jié)合模式（圖2）。
圖2 AMF與PDE4的結(jié)合驗證及結(jié)合模式
AMF是一種眾所周知的雙黃酮類化合物，據(jù)報道具有多種生物活性，如抗炎、抗腫瘤等。最近，作者從另一種藥用植物翠云草（Selaginella uncinata，卷柏科卷柏屬植物）中分離到AMF，證實AMF是一種有效的PDE4抑制劑，具有顯著的抗纖維化作用。然而，包括側(cè)柏和卷柏在內(nèi)的植物粗提取物中AMF的含量相對較低（6.2%），這使得獲得大量純AMF具有挑戰(zhàn)性。
作者開發(fā)了一種大孔樹脂純化方案提高黃酮類化合物的含量，有效地將AMF含量從6.2%濃縮到72.3%，所得到的富集提取物被稱為富黃酮提取物（flavonoid-rich extract，F(xiàn)LDs）。值得注意的是，F(xiàn)LDs表現(xiàn)出與純AMF相當(dāng)?shù)腜DE4抑制活性，這表明制備的FLDs和純化的AMF可能在治療PDE4相關(guān)炎癥性疾病（如銀屑病）方面具有相似的治療潛力。
作者利用M5誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞模型評估AMF和FLDs的體外抗銀屑病作用，發(fā)現(xiàn)AMF和FLDs均能有效抑制異常細(xì)胞增殖，并顯著降低多種炎性細(xì)胞因子的表達(dá)水平。這些結(jié)果表明AMF和FLDs在緩解銀屑病過度增殖和炎癥特征方面具有潛力（圖3）。
圖3 AMF或FLDs體外能有效抑制過度增殖和炎癥
此外，在咪喹莫特（IMQ）誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型中，口服AMF與Apremilast（陽參）相比，顯示出更好的效力，減輕皮膚紅斑、結(jié)垢、皮膚厚度和PASI的嚴(yán)重程度。FLDs軟膏局部給藥，與AMF和Apremilast相比，表現(xiàn)出更明顯的治療效果，這表明五種黃酮類化合物對PDE4具有協(xié)同作用（圖4）。
圖4 AMF和FLDs在體內(nèi)可有效緩解銀屑病皮炎
此外，F(xiàn)LDs升高cAMP水平，降低炎癥因子水平，顯著減少角質(zhì)細(xì)胞增殖，導(dǎo)致角質(zhì)層更薄。免疫組織化學(xué)分析顯示FLDs治療組的CD3+ T細(xì)胞和TNF-α的表達(dá)顯著降低，這兩種細(xì)胞都是銀屑病炎癥和免疫反應(yīng)的關(guān)鍵標(biāo)志物。這些結(jié)果表明FLDs顯著改善了銀屑病的病理特征（圖5）。
圖5 AMF和FLDs增加銀屑病小鼠cAMP并降低了幾種標(biāo)志物表達(dá)水平
為了進(jìn)一步評估FLDs作為銀屑病候選藥物的潛力，作者對小鼠和新西蘭兔進(jìn)行了局部刺激性和亞急性毒性的綜合評估，發(fā)現(xiàn)FLDs在擦傷和正常皮膚上均無刺激性、安全性和無毒性，證實FLDs是一種安全且有前途的治療牛皮癬的候選藥物（圖6）。
圖6?FLDs對小鼠和新西蘭兔均無刺激性、安全、無毒
總結(jié)
研究對1200種中藥植物提取物的內(nèi)部庫進(jìn)行廣泛篩選，確定具有良好安全性的側(cè)柏黃酮提取物（flavonoid-rich extract，F(xiàn)LDs），其在體外和體內(nèi)的抗銀屑病效果優(yōu)于單一活性成分（AFM）和批準(zhǔn)PDE抑制劑阿普斯特。作為PDE4抑制劑，有效緩解IMQ誘導(dǎo)的小鼠銀屑病癥狀，逆轉(zhuǎn)病理性皮膚變化并降低炎癥細(xì)胞因子水平。此外，小鼠和家兔的亞急性毒性研究證實了FLDs的安全性，顯示對皮膚、器官或血液生化參數(shù)沒有不良影響（圖7）。這些發(fā)現(xiàn)表明側(cè)柏FLDs是一種有前景的銀屑病治療新候選藥物。
圖7 側(cè)柏提取物中分離的穗花杉雙黃酮抑制PDE4治療銀屑病
